1. 儀器校準(zhǔn)：別讓"跑偏"的波長毀了你的數(shù)據(jù)！

紫外分光光度計的波長校準(zhǔn)是實驗的第一步，但很多人只是"例行公事"地做一下，結(jié)果測出來的吸收峰位置偏差，導(dǎo)致定性定量全錯！

關(guān)鍵操作：

· 波長校準(zhǔn)：溫度變化會導(dǎo)致儀器機械部件微調(diào)，波長可能"跑偏"。除了定期全面校準(zhǔn)外，每次測定前都要用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如氘燈或氧化鈥濾光片）校正波長，確保誤差在±1nm以內(nèi)。

· 吸光度校準(zhǔn)：用重鉻酸鉀的硫酸溶液（0.005 mol/L）檢查吸光度準(zhǔn)確度，確保儀器響應(yīng)線性。

· 狹縫寬度：大部分藥典方法用2nm縫寬，但像青霉素鉀/鈉這樣的特殊品種，必須用1nm或更窄，否則264nm處的吸光度會偏低。

小貼士： 開機后至少預(yù)熱15分鐘，待儀器穩(wěn)定后再測，否則數(shù)據(jù)波動大。

2. 吸收池配對：你以為的"空白"可能并不空白！

石英吸收池在紫外區(qū)（220~270nm）也有吸收，而且每個池子的透光率可能不同。如果直接拿來就用，測出來的吸光度可能包含池子本身的誤差！

關(guān)鍵操作：

配對實驗：所有吸收池裝入空白溶劑，以其中一個為參比，測定其他池子的吸光度，選吸光度最小的配對使用。

使用技巧：手指只能捏毛玻璃面，透光面用擦鏡紙由上至下擦拭，避免指紋或溶劑殘留影響透光。

清洗方法：普通污染用水或乙醇洗，頑固污漬用發(fā)煙硫酸+硝酸（3:1）浸泡，但千萬別用鉻酸洗液長時間泡，否則會腐蝕光學(xué)表面。

避坑指南： 測揮發(fā)性溶液時記得加蓋，否則溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)會殘留在池壁上，導(dǎo)致下次測定誤差。

3. 溶劑選擇：用錯溶劑，吸收峰直接"位移"！

溶劑可不是隨便選的！極性溶劑（如水、乙醇）可能讓溶質(zhì)的吸收峰發(fā)生紅移或藍移，尤其是含氫鍵的化合物。

關(guān)鍵操作：

溶劑空白檢查：在測定波長附近掃描溶劑，確保無干擾吸收峰。

批次一致性：同一實驗盡量用同一廠家、同一批號的溶劑，避免因純度差異導(dǎo)致數(shù)據(jù)波動。

典型案例： 某實驗室用不同批次的甲醇測某藥物含量，結(jié)果偏差超5%，最后發(fā)現(xiàn)是溶劑雜質(zhì)干擾。

4. 樣品測定：吸光度不在這個范圍，誤差翻倍！

藥典規(guī)定，供試品溶液的吸光度最好在0.3~0.7之間，此時儀器誤差最小。超出這個范圍，數(shù)據(jù)可信度直線下降。

關(guān)鍵操作：

濃度調(diào)整：若吸光度過高，適當(dāng)稀釋；過低則濃縮或換光程更長的吸收池。

平行實驗：含量測定需稱取2份樣品，對照品比較法也要2份對照品，平行操作，偏差應(yīng)≤±0.5%。

關(guān)鍵點： 在最大吸收峰±2nm內(nèi)多測幾個點，確認(rèn)峰位是否正確。若偏離藥典規(guī)定波長±1nm以上，可能樣品不純或儀器有問題。

5. 環(huán)境控制：溫濕度沒管好，儀器壽命減半！

關(guān)鍵要求：

溫度：建議實驗室維持在5~30°C，南方地區(qū)務(wù)必配空調(diào)，避免光學(xué)元件受熱變形。

濕度：超過75%會導(dǎo)致光柵、反射鏡鋁膜銹蝕，產(chǎn)生雜散光，數(shù)據(jù)漂移。

防塵：定期清潔樣品室，避免灰塵堆積影響光路。

紫外分光光度法看似簡單但細節(jié)決定成敗！從儀器校準(zhǔn)到環(huán)境控制，每一步都可能成為"誤差放大器"。