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PCR的基本原理與DNA的體內(nèi)復(fù)制相類似，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火和延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：
模板DNA經(jīng)高溫（95℃左右）加熱一定時(shí)間后，使其解離成單鏈，以便它與引物結(jié)合；
②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：
將溫度降至55℃左右時(shí)，引物與模板DNA單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合；
③引物的延伸：
再將溫度調(diào)至72℃左右（DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度），DNA模板和引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，沿著磷酸到五碳糖（5'→3'）的方向合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。這樣經(jīng)變性、退火和延伸重復(fù)若干個(gè)循環(huán)后，就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。
①模板DNA的變性：
模板DNA經(jīng)高溫（95℃左右）加熱一定時(shí)間后，使其解離成單鏈，以便它與引物結(jié)合；
②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：
將溫度降至55℃左右時(shí)，引物與模板DNA單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合；
③引物的延伸：
再將溫度調(diào)至72℃左右（DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度），DNA模板和引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，沿著磷酸到五碳糖（5'→3'）的方向合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。這樣經(jīng)變性、退火和延伸重復(fù)若干個(gè)循環(huán)后，就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。
