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在微生物培養(yǎng)過程中，判斷雜菌污染的方法有多種，以下是一些常用的判斷方法：
一、觀察培養(yǎng)物的生長情況
1.觀察培養(yǎng)基顏色變化：
若培養(yǎng)基顏色發(fā)生異常變化，如由紅色變?yōu)辄S色或產(chǎn)生渾濁，可能是雜菌污染的表現(xiàn)。
2.檢查菌落形態(tài)：
在平板培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)上，若發(fā)現(xiàn)有異常菌落出現(xiàn)，如菌落形態(tài)、顏色、大小與生產(chǎn)菌不同，可能是雜菌污染。
二、顯微鏡檢查法
1.革蘭氏染色：對(duì)樣品進(jìn)行涂片、染色，然后在顯微鏡下觀察微生物的形態(tài)特征。若發(fā)現(xiàn)有與生產(chǎn)菌形態(tài)特征不一樣的其他微生物存在，即可判斷為雜菌污染。
2.芽孢染色或鞭毛染色：
在染菌初期，雜菌數(shù)量較少，形態(tài)特征不明顯時(shí)，可進(jìn)行芽孢染色或鞭毛染色，以更準(zhǔn)確地識(shí)別雜菌。
三、生化指標(biāo)檢測
1.檢測耗氧量：
當(dāng)雜菌污染時(shí)，如果污染的是好氣性雜菌，會(huì)使溶解氧在較短的時(shí)間內(nèi)下降，甚至接近零，且長時(shí)間不能回升。
如果污染的是非好氣菌，生產(chǎn)菌的代謝由于受污染而遭抑制時(shí)，會(huì)使耗氧量減少，發(fā)酵液中的溶解氧會(huì)升高。
2.檢測pH值變化：
某些雜菌的代謝活動(dòng)會(huì)改變培養(yǎng)基的pH值，因此可以通過檢測pH值的變化來判斷是否發(fā)生雜菌污染。
四、其他檢測方法
1.噬菌體檢查：
若懷疑發(fā)酵液被噬菌體污染，可采用雙層平板法、單層平板法、平板交叉劃線法或快速檢測法進(jìn)行檢查。
若連續(xù)三次樣品的檢查中都發(fā)現(xiàn)噬菌斑，即可判斷為感染噬菌體。
2.無菌試驗(yàn)：
無菌試驗(yàn)是判斷染菌的主要依據(jù)之一，可以通過培養(yǎng)液的顯微鏡檢查、培養(yǎng)液的生化指標(biāo)變化情況等方法來判斷培養(yǎng)液是否污染雜菌。
五、注意事項(xiàng)
1.定期檢查：
在培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期檢查培養(yǎng)物的生長情況，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)雜菌污染。
2.無菌操作：
在進(jìn)行接種、培養(yǎng)等操作時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，避免雜菌污染。
3.培養(yǎng)基質(zhì)量：
確保培養(yǎng)基的質(zhì)量，避免培養(yǎng)基本身攜帶雜菌。
4.設(shè)備清潔與維護(hù)：
定期清潔和維護(hù)培養(yǎng)設(shè)備，避免設(shè)備成為雜菌污染的源頭。
一、觀察培養(yǎng)物的生長情況
1.觀察培養(yǎng)基顏色變化：
若培養(yǎng)基顏色發(fā)生異常變化，如由紅色變?yōu)辄S色或產(chǎn)生渾濁，可能是雜菌污染的表現(xiàn)。
2.檢查菌落形態(tài)：
在平板培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)上，若發(fā)現(xiàn)有異常菌落出現(xiàn)，如菌落形態(tài)、顏色、大小與生產(chǎn)菌不同，可能是雜菌污染。
二、顯微鏡檢查法
1.革蘭氏染色：對(duì)樣品進(jìn)行涂片、染色，然后在顯微鏡下觀察微生物的形態(tài)特征。若發(fā)現(xiàn)有與生產(chǎn)菌形態(tài)特征不一樣的其他微生物存在，即可判斷為雜菌污染。
2.芽孢染色或鞭毛染色：
在染菌初期，雜菌數(shù)量較少，形態(tài)特征不明顯時(shí)，可進(jìn)行芽孢染色或鞭毛染色，以更準(zhǔn)確地識(shí)別雜菌。
三、生化指標(biāo)檢測
1.檢測耗氧量：
當(dāng)雜菌污染時(shí)，如果污染的是好氣性雜菌，會(huì)使溶解氧在較短的時(shí)間內(nèi)下降，甚至接近零，且長時(shí)間不能回升。
如果污染的是非好氣菌，生產(chǎn)菌的代謝由于受污染而遭抑制時(shí)，會(huì)使耗氧量減少，發(fā)酵液中的溶解氧會(huì)升高。
2.檢測pH值變化：
某些雜菌的代謝活動(dòng)會(huì)改變培養(yǎng)基的pH值，因此可以通過檢測pH值的變化來判斷是否發(fā)生雜菌污染。
四、其他檢測方法
1.噬菌體檢查：
若懷疑發(fā)酵液被噬菌體污染，可采用雙層平板法、單層平板法、平板交叉劃線法或快速檢測法進(jìn)行檢查。
若連續(xù)三次樣品的檢查中都發(fā)現(xiàn)噬菌斑，即可判斷為感染噬菌體。
2.無菌試驗(yàn)：
無菌試驗(yàn)是判斷染菌的主要依據(jù)之一，可以通過培養(yǎng)液的顯微鏡檢查、培養(yǎng)液的生化指標(biāo)變化情況等方法來判斷培養(yǎng)液是否污染雜菌。
五、注意事項(xiàng)
1.定期檢查：
在培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期檢查培養(yǎng)物的生長情況，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)雜菌污染。
2.無菌操作：
在進(jìn)行接種、培養(yǎng)等操作時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，避免雜菌污染。
3.培養(yǎng)基質(zhì)量：
確保培養(yǎng)基的質(zhì)量，避免培養(yǎng)基本身攜帶雜菌。
4.設(shè)備清潔與維護(hù)：
定期清潔和維護(hù)培養(yǎng)設(shè)備，避免設(shè)備成為雜菌污染的源頭。
